Cos'è ematossilina eosina?
Ematossilina-Eosina (E&E)
La colorazione con ematossilina-eosina, comunemente abbreviata come E&E o H&E (dall'inglese Hematoxylin and Eosin), è una tecnica di colorazione ampiamente utilizzata in istologia e anatomia patologica. È la colorazione di routine più comune per l'esame dei tessuti al microscopio.
Principi di funzionamento:
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Ematossilina: L'ematossilina è un colorante basico (cationico) che si lega alle componenti acide (anioniche) delle cellule, come il DNA e l'RNA. Tali componenti sono definite basofile e assumono un colore blu-viola. Il nucleo delle cellule, ricco di DNA, si colora intensamente di blu-viola. Altre strutture basofile includono il reticolo endoplasmatico rugoso e la matrice cartilaginea.
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Eosina: L'eosina è un colorante acido (anionico) che si lega alle componenti basiche (cationiche) delle cellule, come le proteine del citoplasma e le fibre extracellulari. Tali componenti sono definite eosinofile o acidofile e assumono un colore rosa-rosso. Il citoplasma, molte proteine e fibre come il collagene si colorano di rosa.
Procedura generale:
La procedura tipica di colorazione E&E prevede i seguenti passaggi:
- Fissazione: Il tessuto viene fissato per preservare la sua struttura cellulare. La formalina è un fissativo comune.
- Inclusione: Il tessuto viene incluso in paraffina per consentire il sezionamento sottile.
- Sezionamento: Il tessuto viene sezionato in fette sottili (tipicamente 4-5 micrometri) utilizzando un microtomo.
- Deparaffinizzazione: La paraffina viene rimossa dal campione utilizzando solventi come lo xilene.
- Reidratazione: Il tessuto viene reidratato passando attraverso una serie di bagni di alcol a concentrazioni decrescenti fino all'acqua.
- Colorazione con ematossilina: Il tessuto viene immerso in una soluzione di ematossilina.
- Lavaggio: L'eccesso di ematossilina viene rimosso.
- Differenziazione (o "Bluificazione"): Questo passaggio opzionale può essere eseguito per rendere la colorazione dell'ematossilina più nitida e resistente. Spesso si utilizza acqua leggermente alcalina.
- Colorazione con eosina: Il tessuto viene immerso in una soluzione di eosina.
- Lavaggio: L'eccesso di eosina viene rimosso.
- Disidratazione: Il tessuto viene disidratato passando attraverso una serie di bagni di alcol a concentrazioni crescenti.
- Chiarificazione: L'alcol viene sostituito con un solvente miscibile con il mezzo di montaggio, come lo xilene.
- Montaggio: Il vetrino viene montato con un coprioggetti e un mezzo di montaggio trasparente.
Applicazioni:
La colorazione E&E è utilizzata per:
- Visualizzare la morfologia cellulare e tissutale.
- Identificare anomalie strutturali associate a malattie.
- Diagnosticare malattie, inclusi tumori.
- Valutare la progressione della malattia.
- Monitorare la risposta al trattamento.
- Ricerca biologica.
Vantaggi:
- Relativamente economica.
- Semplice da eseguire.
- Fornisce informazioni diagnostiche preziose.
- Adatta a un'ampia varietà di tessuti.
Limitazioni:
- Non evidenzia tutti i tipi di cellule o strutture tissutali.
- Può essere necessario utilizzare colorazioni speciali per identificare specifici componenti cellulari o molecole.
- L'interpretazione richiede esperienza.